作业帮什么是BAC 末端测序?有关DNA测序的方面我比较的愚钝，我想知道的是这个BAC末端测序中的BAC是什么意思？测序原理是什么？希望网上粘贴的能修改一下。
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/02 20:51:17
什么是BAC 末端测序?有关DNA测序的方面我比较的愚钝，我想知道的是这个BAC末端测序中的BAC是什么意思？测序原理是什么？希望网上粘贴的能修改一下。
什么是BAC 末端测序?有关DNA测序的方面
我比较的愚钝，我想知道的是这个BAC末端测序中的BAC是什么意思？测序原理是什么？希望网上粘贴的能修改一下。
什么是BAC 末端测序?有关DNA测序的方面我比较的愚钝，我想知道的是这个BAC末端测序中的BAC是什么意思？测序原理是什么？希望网上粘贴的能修改一下。
BAC是细菌人工染色体意思,之所以有BAC文库的出现,是因为基因组序列太长,测序,以及筛选基因等没有办法完成,所以将基因组片段随机打断成片段,连到载体上构建成一系列的重组子,这样当你需要特定的序列,只需要筛选出自己要的那个bac重组子就行了.说的有点过于简单,不知道你能明白否?末端测序也是采用的双脱氧终止法的.双脱氧终止法的原理是；碱基之间是通过俩个碱基的5‘磷酸基团和3’羟基连接的,双脱氧终止法就是利用了这个3‘羟基,将3’羟基脱氧变成氢键,那么这样下一个碱基的5‘磷酸基团就没有办法连到前一个碱基上了.所以如果在做测序pcr的时候加一部分正常的dNTP(3号位为羟基),加一定量的ddNTP(2,3号位都是氢键),那么在第一个碱基后如果接上去的是dNTP,那么就可以接着连第三个碱基,如果连得是ddNTP,那么就没有办法连下个碱基形成链终止,在测序pcr中,数以万计的反应,那么就会出现2个碱基后终止的链,也有可能出现3个,4个,N个碱基后终止的链,这样就形成了一系列从一个碱基到N个碱基的序列（其最后一个碱基都是三号位为氢键的,这个应该理解吧）.那么如果我们在连上去的ddNTP上连上个荧光基团(四种ddNTP连上不同的荧光基团),那么将这一系列长度的链跑胶,会形成一系列的带,通过每条带最后一个碱基的荧光通过机器就能够区分是什么碱基,将这些碱基拼接好后就是你要的序列了.
建立了一种用PCR方法筛选富含高度重复序列的大麦BAC DNA 文库和直接对 BAC DNA进行末端测序的方法。用PCR技术进行大麦BAC DNA 文库（含816个平板，每个平板含384个克隆）的筛选分4步进行。在实验中，建立了两个水平的BAC DNA池（一级池和二级池）。一个二级池由一个平板（含有384个克隆）的DNA 组成，一个一级池由连续10个稀释100倍的二级池的DNA混合而成（如1～10...
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建立了一种用PCR方法筛选富含高度重复序列的大麦BAC DNA 文库和直接对 BAC DNA进行末端测序的方法。用PCR技术进行大麦BAC DNA 文库（含816个平板，每个平板含384个克隆）的筛选分4步进行。在实验中，建立了两个水平的BAC DNA池（一级池和二级池）。一个二级池由一个平板（含有384个克隆）的DNA 组成，一个一级池由连续10个稀释100倍的二级池的DNA混合而成（如1～10，11～20等），共82个一级池。BAC DNA 文库筛选的第一步是对82个一级池的筛选。得到阳性一级池后（如2号一级池），对其所含的10个二级池（从11～20）进行第二步筛选。得到阳性二级池后，培养相应的阳性平板的所有克隆（384个），从头开始（左上侧），每相邻的4个克隆为一组，在96孔板上(4 X 96=384) 进行第三轮PCR反应；之后对筛选结果为阳性的4个克隆分别进行菌落 PCR（第四轮）得到单一阳性克隆。根据BAC DNA Hind III 酶切指纹图谱，对同一引物筛选的BACs进行重叠群作图（Contig）。对代表contig 的两端的BAC DNA直接进行末端测序并对测序结果Blast, 以检测其在大麦中是否属于单拷贝序列。根据测序和Blast结果设计引物，用中国春附加系（附加大麦染色体）对来自BAC克隆的引物进行染色体定位并用分离群体进行遗传学作图，以确定是否可以用作下一步的染色体步行。
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