作业帮求个多克隆抗体的制备的视频最好是以兔子为实验对象的
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/04/29 04:56:49
求个多克隆抗体的制备的视频最好是以兔子为实验对象的
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1.器材：
剪刀（剪兔毛用）一把、弯头眼科手术镊子（游离血管用）一把、直头眼科手术剪（剪血管用）一把,手术刀架,手术刀片,注射器(1ml、10ml,25ml)附针头,兔子固定架,灭菌三角烧瓶(200ml)或平皿（直径18cm）、弯头止血钳四把,直头止血钳两把,手术缝合线,塑料放血管,纱布等.
2.试剂：
生理盐水(或PBS),
弗氏完全佐剂（Freund’s complete adjuvant,FCA） Sigma F-5881,
弗氏不完全佐剂(Freund’s incomplete adjuvant,FIA) Sigma F-5506,
二甲苯,酒精棉,脱脂棉,2% NaN3
3.兔子的选择：
兔子的重量应在四斤以上,两耳光滑,明显可见耳静、动脉,健康.
4.Pre-bleeding：
抗原注射以前需要收集一些正常血清,已备检测抗体时作为阴性对照.待兔子在新环境中稳定,大概需要四天左右时间,可以进行耳动脉取血.取血量约5ml足矣.
免疫用的抗原必须纯化,否则影响抗体的质量.抗原经FCA或FIA充分乳化后才能注射.将抗原液与佐剂等比例混合后,置于混合器上使之剧烈振荡使抗原充分乳化,乳化过程比较费时、费力,但若乳化不充分,会影响免疫的效果,振荡后,1000rpm离心一分钟,如水相和油相不分层即可注射.首次免疫用FCA,以后都用FIA.
免疫方法可采用背部多点注射法.即于家兔脊柱两旁选4-6点皮下注射,每点注0.1ml,间隔2周后再于上述部位选不同点注射（不要选择临近位点,否则溃疡愈合不好）.每次免疫的抗原量约100μg.免疫次数在四五次即可,抗原用量大可以减少次数.
免疫一周后,可以耳动脉取血检测抗体效价.因为起初几次免疫产生的抗体的效价比较低,头两次取血,够检测用即可.在三次免疫后,可以获得较高效价的抗体,每次取血量可以在40ml,不要取太多,否则会造成兔子贫血.最后一次取血可以采用颈动脉放血,具体操作如下：
a.家兔仰卧于兔架上固定头部,用纱布固定四肢.头部略放低以暴露颈部.剃毛并消毒皮肤；
b.沿颈部中线用手术刀切开皮肤约10cm,分离皮下结缔组织,直至暴露出气管两侧的胸锁乳突肌（小心操作,如碰到小血管出血,可用止血钳止血）
c.用直头止血钳分离胸锁乳突肌与气管间的颈三角区疏松组织,暴露出颈总动脉后用弯头眼科镊使之游离,剥离神经和结缔组织；
d.于动脉下套入两根黑丝线,分别置于远心及近心端.结扎远心端的丝线.近心端的动脉用血管夹夹住；
e.用小拇指垫在血管下,用尖头眼科手术剪在两根丝线间的动脉璧上剪一小口（勿剪断）,插入塑料放血管.再将近心端的丝线结扎固定于放血管上,以防放血管滑脱；
f.松开止血钳,使血液流入容器中.一般一只家兔可放血100-120ml.
5.血清的分离：
如果用三角瓶或平皿盛血,将器皿倾斜放置于37oC烘箱2hr,转移到4oC沉淀过夜,第二天早上用吸管吸取血清.如果用离心管收集,37oC烘箱放置2hr,转移到4oC沉淀过夜,第二天早上离心,10000RCF,10分钟.在血清中加入 NaN3 至终浓度0.02%,分装后-20oC保存.